Susceptibilidade e resposta imune humoral do hospedeiro natural Gallus gallus domesticus a esporozoítas de Plasmodium gallinaceum (Brumpt, 1935)

Investigou-se a susceptibilidade da galinha doméstica, hospedeiro natural do Plasmodium gallinaceum (Pg), aos esporozoítas inoculados por diferentes vias, bem como a sua capacidade de produzir anticorpos anti-esporozoítas. Aves de uma ou três semanas de idade foram inoculadas com esporozoítas pela picada de Aedes Fluviatilis, pela via subcutânea (s.c.) ou intravenosa(i.v.) e as parasitemias acompanhadas através de esfregaços sanguíneos diários. Nas aves de uma semana inoculadas pela picada de Aedes ocorreu 100 por cento de infecção, enquanto nas aves de três semanas ocorreu variação de 40 a 100 por cento, proporcional ao número de fêmeas alimentadas. A inoculação de esporozoítas pela seringa resultou em 100 por cento de infecção. O período pré-patente (PPP) da malária foi menor na inoculação i.v., no entanto, a idade da ave não influenciou o PPP. Aves mais jovens tiveram maiores parasitemias e mortalidades. Nos soros coletados após a primoinoculação, anticorpos anti-esporozoítas foram detectados pela imunofluorescência indireta (IFI) nos dias 7 e 14 após inoculação, declinando na terceira semana.Na Elisa com esporozoítas isolados de mosquitos, os soros foram positivos a partir da terceira semana. Nas três reinoculações de esporozoítas, os títulos de anticorpos atingiram um platô após o segundo inóculo. As aves inoculadas pelas tr~es vias apresentaram títulos similares ao final das reinoculações, embora as que foram inoculadas pela picada apresentaram maior aumento no título de anticorpos. Pelas análises de western-blot com sedimento ou antígenos solúveis de esporozoítas, a proteína circumesporozoíta (cs) foi reconhecida pelos soros de aves inoculadas por qualquer das três vias utilizadas, a partir da segunda semana após inoculação. Outras proteínas de variados pesos moleculares foram também reconhecidas, algumas pertencentes a antígenos obtidos de Aedes não infectados, entre elas uma proteína de 7 kda.

No modelo aviário, o hospedeiro natural produziu anticorpos contra os antígenos de esporozoítas com elevados títulos e prevalência, tendo a proteína CS confirmado a sua imunogenicidade. A possível presença de anticorpos protetores nos soros de aves expostas aos esporozoítas e o estudo das diferenças qualitativas entre os esporozoítas inoculados pela picada e seringa, suas conseqüencias na interação parasita-hospedeiro e resposta imune subseqüente necessitam ser melhor estudadas no futuro.

Susceptibilidade e resposta imune humoral do hospedeiro natural Gallus gallus domesticus a esporozoítas de Plasmodium gallinaceum (Brumpt, 1935) / Susceptibility and humoral immune response of the natural host Gallus gallus domesticus the sporozoite of Plasmodium gallinaceum (Brumpt, 1935)

Investigou-se a susceptibilidade da galinha doméstica, hospedeiro natural do Plasmodium gallinaceum (Pg), aos esporozoítas inoculados por diferentes vias, bem como a sua capacidade de produzir anticorpos anti-esporozoítas. Aves de uma ou três semanas de idade foram inoculadas com esporozoítas pela picada de Aedes Fluviatilis, pela via subcutânea (s.c.) ou intravenosa (i.v.) e as parasitemias acompanhadas através de esfregaços sanguíneos diários. Nas aves de uma semana inoculadas pela picada de Aedes ocorreu 100 por cento de infecção, enquanto nas aves de três semanas ocorreu variação de 40 a 100 por cento, proporcional ao número de fêmeas alimentadas. A inoculação de esporozoítas pela seringa resultou em 100 por cento de infecção. O período pré-patente (PPP) da malária foi menor na inoculação i.v., no entanto, a idade da ave não influenciou o PPP. Aves mais jovens tiveram maiores parasitemias e mortalidades. Nos soros coletados após a primoinoculação, anticorpos anti-esporozoítas foram detectados pela imunofluorescência indireta (IFI) nos dias 7 e 14 após inoculação, declinando na terceira semana. Na Elisa com esporozoítas isolados de mosquitos, os soros foram positivos a partir da terceira semana. Nas três reinoculações de esporozoítas, os títulos de anticorpos atingiram um platô após o segundo inóculo. As aves inoculadas pelas três vias apresentaram títulos similares ao final das reinoculações, embora as que foram inoculadas pela picada apresentaram maior aumento no título de anticorpos. Pelas análises de western-blot com sedimento ou antígenos solúveis de esporozoítas, a proteína circumesporozoíta (cs) foi reconhecida pelos soros de aves inoculadas por qualquer das três vias utilizadas, a partir da segunda semana após inoculação. Outras proteínas de variados pesos moleculares foram também reconhecidas, algumas pertencentes a antígenos obtidos de Aedes não infectados, entre elas uma proteína de 7 kda. No modelo aviário, o hospedeiro natural produziu anticorpos contra os antígenos de esporozoítas com elevados títulos e prevalência, tendo a proteína CS confirmado a sua imunogenicidade. A possível presença de anticorpos protetores nos soros de aves expostas aos esporozoítas e o estudo das diferenças qualitativas entre os esporozoítas inoculados pela picada e seringa, suas conseqüencias na interação parasita-hospedeiro e resposta imune subseqüente necessitam ser melhor estudadas no futuro.

The immunodominant surface antigen of Plasmodium gallinaceum is present in both the salivary gland and oocyst sporozoites

1. Monoclonal antibodies (MAbs) against surface antigens of Plasmodium gallinaceum sporozoites, an avian malaria parasite, were produced using spleen cells from mice immunized with sporozoites from mosquito salivary glands (SGS) or from midadgusts containing oocysts (OoS). 2. All of the 15 MAbs teted (11 anti-SGS and 4 anti-OoS) reacted with SGS and OoS by indirect immunofluorescence and circumsporozoiter precipitation reactions. Fourteen of these MAbs (11 anti-SGS and 3 anti-OoS) produced a Western blot (WB) patten identical to that produced with serum from mice lyperimmunized with viable intacts sporozoites. 3. All MAbs and the immune sera recognized only two polypeptide bands of approximate molecutlar weight 78 and 64KDa. 4. No difference in the WB pattern was observed when-or 12-day SGS or OoS extracts were used as antigens in WB. This antigenic similary was confirmed when the total protein extracts were visualized on silver-stained SDS-PAGE gel

Immunodiagnosis of malaria.

Different approaches to immunodiagnosis of malaria in an endemic country have been described in this paper. Demonstration of circulating malaria antigen may be done by gel-diffusion and counter-immunoelectrophoresis. Parasite associated antigen may be demonstrated by highly sensitive methods like radio-immunoassay or enzyme linked immuno sorbent assay. Malaria antibodies of the IgG type being long lasting do not appear to have any role in immuno-diagnosis. However, determination of malaria specific IgM antibodies by P. gallinaceum haemagglutination test or IgM immunofluorescence test may be simple and useful in immunodiagnosis of malaria. The tests though evaluated in different laboratories may not be applicable in the field for diagnosis of malaria at the present moment. However, it is envisaged that with the availability of different specificities of monoclonal antibodies by way of hybridoma technology and also with the help of recombinant DNA techniques immunodiagnosis of malaria in the field situation may become a reality.